Laboratoire des Interactions Moléculaires et Réactivité Chimique et Photochimique
UMR 5623

Séminaire par Reine Nehmé / Institut de Chimie Organique et Analytique - Orléans

Jeudi 28 septembre 2017 - 15h - salle Maroni / MHT

Reine Nehmé, chercheuse à l'Institut de Chimie Organique et Analytique à Orléans, fera une présentation sur les : Essais enzymatiques en électrophorèse capillaire - retour d’expérience

Les enzymes sont des catalyseurs biologiques qui accélèrent les transformations chimiques de molécules spécifiques appelées substrats. Les cellules coordonnent leurs activités via divers signaux impliquant souvent des cascades de signalisation enzymatique. Toute dérégulation peut entraîner des pathologies graves telles que le cancer, la maladie d’Alzheimer et le diabète chez l’Homme. A ce titre, de petites molécules sont fréquemment employées afin d’éviter le chaos dans le métabolisme cellulaire. Ainsi, les inhibiteurs interagissent avec l’enzyme en diminuant ou en arrêtant son activité. Dans le domaine de la cosmétique, le vieillissement de la peau par exemple est majoritairement enzyme-dépendant.

Une réaction enzymatique est caractérisée par des constantes cinétiques (Km, Vmax, KI et IC50). Mesurer ces paramètres permettra d’identifier les agents responsables du dysfonctionnement du processus cellulaire, de mieux viser les cibles thérapeutiques et de dépister les maladies à l’état précoce. Les techniques conventionnelles spectrophotométriques, fluorimétriques ou radiométriques utilisées pour étudier les réactions enzymatiques consomment des quantités considérables d’échantillons et ont un bilan environnemental souvent défavorable. L’électrophorèse capillaire présente de nombreux atouts pour la détermination des constantes cinétiques des enzymes et peut aussi être utilisée comme micro- ou nano- réacteur enzymatique. Elle a ainsi émergé comme outil de miniaturisation des essais biochimiques puisque la plupart des enzymes intéressantes, notamment humaines ou virales, sont peu accessibles et très onéreuses.

L’objectif de notre travail est de développer en EC des essais enzymatiques simples, économes, fiables, sensibles et rapides pour la détermination des constantes cinétiques de diverses familles d’enzymes. Plusieurs systèmes enzymatiques ont pu être caractérisés permettant d’illustrer l’intérêt des essais enzymatiques basés sur l’EC et utilisant divers détecteurs (UV, C4D, LIF et HRMS). Parmi ces enzymes on cite les kinases, les galactosidases, la myrosinase, l’élastase et l’hyaluronidase. Ce travail vient en appui de toute étude visant le développement de modulateurs de l’activité enzymatique.

 

2017 IMRCP